磁珠是一類(lèi)具有超順磁性的磁納米粒子。所謂超順磁性，是指磁珠在外磁場(chǎng)的作用下具有弱磁性，容易被吸附，撤去磁場(chǎng)后沒(méi)有剩磁，容易被分散。

磁珠的結(jié)構(gòu)一般包含磁性的內(nèi)核（通常為鐵的衍生物）、具有良好生物相容性的外殼 以及 外殼上偶聯(lián)的各種配體（如羧基、氨基等官能團(tuán)或Protein A/G、抗體等生物大分子）。下圖為羧基磁珠示意圖。

磁珠之所以能在蛋白互作上大顯身手，突出的特點(diǎn)就是蛋白荷載量高，特異性強(qiáng)，樣品損失小，操作便捷。總之就是簡(jiǎn)單加方便！

1. 磁珠與樣品共同孵育，捕獲目的蛋白；

2. 加外磁場(chǎng)吸附磁珠，棄掉上清液；

3. 加入漂洗液漂洗，去掉非特異結(jié)合蛋白；

4. 加入洗脫液洗脫，收集目的蛋白。

蛋白純化磁珠常用的配體有Protein A、Protein G、Protein A/G、標(biāo)簽蛋白抗體、鏈霉親和素蛋白等。

Protein A/G磁珠是在磁珠表面偶聯(lián)Protein A/G，而Protein A/G能與IgG相結(jié)合，因此可以用來(lái)純化各種抗體。Protein A/G磁珠也可以通過(guò)結(jié)合不同的抗體，形成“磁珠-抗體-抗原”復(fù)合物，從而捕獲相應(yīng)的抗原或互作蛋白。

Protein A/G磁珠工作原理圖

相同工作原理的磁珠還有Protein A磁珠和Protein G磁珠。Protein A和Protein G以及Protein A/G在與不同抗體亞型的結(jié)合能力上有所差別，選擇時(shí)可以參照下表。Protein A/G由于是Protein A和Protein G抗體識(shí)別區(qū)域的重組融合蛋白，因此通常在實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)更佳。

需要注意的是，Protein A能與抗體Fc端特異性結(jié)合，Protein G不僅能與Fc端結(jié)合，還能低親力與Fab端特異性結(jié)合。

所以需要純化抗體Fab端的小伙伴，可以選擇Protein A磁珠特異性去除Fc端，這樣就可以獲得Fab端啦！

另外，我司還提供一種瓊脂糖磁珠，與普通磁珠相比，瓊脂糖磁珠的IgG蛋白荷載量更高，更適合用來(lái)純化大量的IgG。

根據(jù)抗原抗體結(jié)合的特異性，研究者將抗體直接與磁珠偶聯(lián)，獲得抗體偶聯(lián)磁珠，如anti-Flag免疫磁珠、anti-Myc免疫磁珠等，可以用來(lái)直接捕獲對(duì)應(yīng)的抗原。

與ProteinA/G磁珠相比，抗體偶聯(lián)磁珠不用考慮抗體種屬以及亞型的選擇，操作上也少了磁珠和抗體結(jié)合的步驟，大大縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。目前大部分磁珠偶聯(lián)的抗體為通用的標(biāo)簽蛋白抗體，包括Flag、HA、Myc、GST、His等，因此更適合用來(lái)捕獲外源表達(dá)的標(biāo)簽融合蛋白。

用Protein A/G磁珠做免疫沉淀試驗(yàn)（IP）時(shí)，沒(méi)有捕獲到目的蛋白？

在IP過(guò)程中出現(xiàn)非特異性條帶如何處理？

進(jìn)行Protein A/G磁珠和抗體偶聯(lián)磁珠的回收時(shí)，需要注意哪些問(wèn)題？

Protein A/G磁珠和抗體偶聯(lián)磁珠回收步驟有哪些？