保存條件 

      本試劑盒中RNase-Free DNase I 和 DNase Buffer 置于-20 ℃保存，其余組分常溫（10~25℃）保 存 18 個月。

產品簡介 

      本產品適合于從 10~200 mg 普通植物中提取總 RNA。試劑盒基于硅膠柱純化技術，提取過程中無 需使用有毒的酚氯仿抽提，整個提取過程只需 20~30 min。試劑盒采用 DNase I 膜上消化，可高效 地去除 DNA，得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern Blot、Poly A 純化，核酸保護和體外翻 譯等實驗。 

產品特點 

? 操作簡便：20~30 min 內完成數個樣品的總 RNA 提取；

? 高效去除基因組 DNA：DNase I 膜上消化，高效去除 DNA； 

? 安全低毒：無需酚、氯仿等有毒試劑； 

? RNA 純度高：提取的 RNA 無雜質殘留，適用于對純度、完整性要求很高的下游實驗。 

適用范圍 

       本產品適用于普通植物樣品的總 RNA 提取。 

注意事項 

   1. 第一次使用前應在漂洗液 PRW1 中加入 4 倍體積的無水乙醇；

   2. DNase I 工作液的配制：10 μL DNase I + 60 μL DNase Buffer，輕輕吹打混勻，現用現配； 

   3. 使用無 RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染，經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌、汗 液及 RNase 等，可能導致 RNA 降解； 

   4. RNA 在裂解液 PRL 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含 RNase 的塑 料和玻璃器皿。玻璃器皿可在 150℃烘烤 4 h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min，然 后用水徹底清洗、滅菌； 

   5. 配制溶液如 50%、70%乙醇應使用 RNase-Free ddH2O（將水加入干凈的玻璃瓶中，加 DEPC 至終濃度為 0.1%(V/V)，混勻放置過夜后高壓滅菌）； 

使用方法 

   1. 樣品處理：用液氮將植物樣品研磨成細小粉末。稱取 10~200 mg 粉末至 1.5~2.0 mL 預冷的離 心管中（加裂解液前樣品不能解凍，初次使用推薦樣品量為 30~50 mg，根據結果再調整用量）； 

   2. 立即加入 600 μL Buffer PRL 及 20 μL β-巰基乙醇（自備）至樣品中，高速渦旋 20~60 s 混勻 樣品，室溫靜置 5 min；

   3. 室溫下 14,000×g 離心 5 min； 

   4. 將 RNase-Free gDNA Remove Column 裝在 2 mL 收集管中，把上一步的上清液轉移至柱子 中。12,000×g 離心 1 min，棄去柱子，保留濾液；

   5. 取 0.5 倍體積無水乙醇加入濾液中，用移液槍吸打 3~5 次； 

   6. 將 RNase-Free RNA Column 裝在 2 mL 收集管中。取上一步混合液（≤750 μL）至柱子中。 12,000×g 離心 1 min； 

   7. 棄濾液，把柱子裝回收集管中。取剩余混合液至柱子，12,000×g 離心 1 min； 

   8. 棄濾液，把柱子裝回收集管中。加入 500 μL Buffer PRW，10,000×g 離心 10 s； 

   9. 棄濾液，把柱子裝回收集管中，加入 70 μL 配置好的 DNase I 溶液至柱子膜中央（DNase I 溶液：10 μL DNase I+60 μL DNase Buffer，輕輕吹打混勻）。室溫放置 15 min。

 10. 加入 500 μL Buffer PRW，室溫靜置 1 min，13,000×g 離心 1 min；

 11. 棄濾液，把柱子裝回收集管。加入 500μL Buffer PRW1（已添加指定量無水乙醇）至柱子中， 10,000×g 離心 10 s； 

 12. 重復步驟 11； 

 13. 棄濾液，把柱子裝回收集管。13,000×g 離心 2 min，開蓋置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸 附材料中殘留的漂洗液； 

注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液的殘留，可能會影響后續的 RT 等實驗。 

 14. 將柱子轉移至 1.5 mL 離心管。加入 30~100 μL RNase Free ddH2O 至吸附膜中央。室溫靜置 3 min。12,000×g 離心 1 min（柱子最小的洗脫體積是 30 μL，若 RNA 產量超過 30 μg，推薦 進行第二次洗脫）棄去柱子，將洗脫的 RNA 置于-80 ℃保存。 

常見問題與解決辦法 

 Q1：柱子出現堵塞？ 

 A1： 

   1) 樣品用量過多。按照說明書推薦的要求適量取樣； 

   2) 樣品富含多糖多酚類物質。處理富含多糖多酚的組織，推薦用專用試劑盒提取； 

   3) 離心溫度過低。本產品使用操作均在室溫下進行。 

 Q2：提取的 RNA 出現降解？ 

 A2： 

   1) 樣品用量過多。影響裂解液的裂解能力，造成 RNase 未被充分抑制，導致 RNA 降解，建議參考 說明書推薦取樣量，若要增加樣品起始量，則后續實驗中各溶液量均要按等比例增加。對于內源 RNase 含量較多的組織應減少樣品量，適當增加裂解液用量； 

   2) 樣品保存不當。反復解凍會引起 RNA 降解，盡量使用新鮮樣品或者解凍次數不超過 2 次的樣品；

   3) 操作過程中引入 RNase 污染。請使用 RNase-Free 的工具、試劑和耗材； 

   4) 電泳過程中發生降解。使用 RNase-Free 的 Loading Buffer、瓊脂糖和電泳緩沖液等。

 Q3：RNA 得率低？ 

 A3：

   1) 樣品用量過多。樣品過量會影響裂解效果，建議按照說明書要求適量取樣； 

   2) 樣品裂解不充分。請按照說明書的要求進行充分研磨、裂解； 

   3) 洗脫不充分。RNase Free H2O 需直接加到膜中央，并靜置 2 min 后再離心，必要時可進行二次 洗脫以提高產量；

   4) 吸附柱有乙醇殘留。使用 Buffer PRW1 漂洗后需要開蓋晾干吸附柱中的乙醇。 

 Q4：提取的 RNA 中有 DNA 污染？ 

 A4： 

   1) 樣品用量過多。超出試劑盒規定的樣本量影響裂解液的裂解能力可能會導致基因組的污染； 

   2) 次生代謝物較多。次生代謝物含量高的樣本在提取 RNA 時易出現基因組的污染； 

   3) 操作過程中需要進行去除基因組 DNA 的操作，若 DNA 含量較多，可延長 DNase I 消化時間或 重復消化。